Biotin-LC-Sulfo-NHS（磺基-NHS-LC-生物素）是一種水溶性胺反應(yīng)性生物素化試劑，具有以下核心特點(diǎn)和應(yīng)用：

一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與組成

• 生物素分子：作為標(biāo)記基團(tuán)，與親和素（Avidin）或鏈霉親和素（Streptavidin）結(jié)合，實(shí)現(xiàn)高親和力檢測(cè)與純化。

• 長(zhǎng)鏈己酸基團(tuán)（LC）：提供空間間隔臂（spacer arm），減少生物素與目標(biāo)分子間的空間位阻，優(yōu)化標(biāo)記效率。

• 磺化N-羥基琥珀酰亞胺酯基團(tuán)（Sulfo-NHS）：賦予試劑水溶性，并使其在溫和條件下（pH 7.0-9.0）與伯胺基團(tuán)（-NH?）發(fā)生特異性反應(yīng)，形成穩(wěn)定酰胺鍵。

二、物理化學(xué)性質(zhì)

• 外觀與溶解性：白色固體，溶于水及部分有機(jī)溶劑（如二甲基甲酰胺，DMF），生理緩沖液中溶解性優(yōu)異，無(wú)需額外添加有機(jī)溶劑。

• 反應(yīng)活性：

• 靶標(biāo)：與含有伯胺基團(tuán)的生物分子（如蛋白質(zhì)、抗體）反應(yīng)，尤其是賴(lài)氨酸殘基的ε-氨基或多肽的氨基末端。

• 條件：在pH 7.0-9.0的緩沖液中反應(yīng)，保持生物分子天然活性。

• 產(chǎn)物穩(wěn)定性：形成的酰胺鍵穩(wěn)定，適用于長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)存儲(chǔ)。

• 水溶性機(jī)制：磺酸鈉基團(tuán)（-SO?Na）增強(qiáng)親水性，防止試劑穿透細(xì)胞膜，確保僅標(biāo)記細(xì)胞表面蛋白。

三、核心應(yīng)用領(lǐng)域

1. 蛋白質(zhì)與抗體標(biāo)記：

• 標(biāo)記對(duì)象：抗體、重組蛋白、可溶性MHC/肽復(fù)合物等。

• 實(shí)驗(yàn)技術(shù)：免疫印跡（Western blotting）、免疫組化（IHC-P）、免疫沉淀（IP）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、流式細(xì)胞術(shù)（FC）等。

• 優(yōu)勢(shì)：通過(guò)生物素-親和素系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)分子的高效檢測(cè)、定位與純化。

2. 細(xì)胞表面蛋白特異性標(biāo)記

• 機(jī)制：試劑無(wú)法穿透完整細(xì)胞膜，僅標(biāo)記暴露于細(xì)胞表面的伯胺基團(tuán)。

• 應(yīng)用場(chǎng)景：

• 研究受體與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)與調(diào)控。

• 分析極化上皮細(xì)胞中膜蛋白的分布。

• 結(jié)合熒光或酶標(biāo)記技術(shù)，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞表面分子的可視化與定量。

3. 蛋白質(zhì)組學(xué)研究：

• 功能：標(biāo)記重組蛋白質(zhì)，便于通過(guò)親和層析（如鏈霉親和素磁珠）進(jìn)行純化。

• 優(yōu)勢(shì)：提高蛋白質(zhì)純度，減少非特異性結(jié)合，適用于后續(xù)質(zhì)譜分析或功能研究。

四、操作優(yōu)勢(shì)

• 無(wú)有機(jī)溶劑需求：反應(yīng)可在純水相緩沖液中進(jìn)行，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程。

• 高效標(biāo)記：長(zhǎng)鏈間隔臂減少空間位阻，提升標(biāo)記效率。

• 細(xì)胞兼容性：非膜穿透性確保僅標(biāo)記細(xì)胞表面分子，避免胞內(nèi)蛋白干擾。

五、儲(chǔ)存與使用注意事項(xiàng)

• 儲(chǔ)存條件：干燥、-20℃避光保存，防止受潮或降解。

• 操作規(guī)范：

• 取用時(shí)保持干燥，避免反復(fù)凍融。

• 嚴(yán)格按推薦濃度使用，過(guò)量可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合。

• 反應(yīng)后需通過(guò)透析或超濾去除未反應(yīng)試劑。

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